?無菌操作?：細(xì)胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實(shí)驗(yàn)人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進(jìn)行無菌檢測(cè)。不同細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細(xì)胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細(xì)胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測(cè)?：定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體、細(xì)菌、真菌等污染檢測(cè)。

CO? 獨(dú)立培養(yǎng)基

產(chǎn)品介紹

二氧化碳獨(dú)立培養(yǎng)基采用磷酸鹽緩沖體系。配方中含有少量以滿足必需的碳酸氫鹽依賴性功能。由于不使用合成緩沖液如Hepes，因此消除了與此類緩沖系統(tǒng)相關(guān)的細(xì)胞毒性效應(yīng)。另外，該培養(yǎng)基的優(yōu)化配方可提高細(xì)胞生產(chǎn)和 CO2 利用率，因此無需外源性 CO2 即可維持 CO2 依賴性細(xì)胞功能。

二氧化碳獨(dú)立培養(yǎng)基用于支持各種懸浮和貼壁的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)，例如上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞系，而不需要 CO2 培養(yǎng)箱。

該培養(yǎng)基是在大氣條件下運(yùn)輸細(xì)胞或組織以及處理小鼠胚胎的理想選擇。如需長(zhǎng)期培養(yǎng)，

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護(hù)目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細(xì)胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動(dòng)凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細(xì)胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細(xì)胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細(xì)胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細(xì)胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細(xì)胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細(xì)胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細(xì)胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

小鼠膽囊收縮素8(CCK-8)試劑盒

Rat thrombin receptor () ELISA Kit 大鼠受體()試劑盒

HumanN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISAKIT 人N端前腦素(-proBNP)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanAialNaiureticPeptide,ANP試劑盒人心肽(ANP)試劑盒

植物源性食品羽扇豆(lupine)試劑盒20次

Humahrombopoietin，TPOELISAKit人血小板生成素(TPO)試劑盒

大鼠異檸檬酸脫氫酶1(IDH1)試劑盒 ，英文名： IDH1 ELISA Kit

Mouse leptin receptor (LR/Ob-R) ELISA Kit 小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)試劑盒

MouseSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit 小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(sCD40L)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumandesmin,DesELISAKit人結(jié)蛋白

細(xì)胞Akt1/PKBa激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20/50/100

ELISAKitNF-κBp65大鼠核因子-κB亞基p65親和肽

兔內(nèi)皮抑素(rabbit ES)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔內(nèi)啡肽-b(rabbit Endorphin-b)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔雌二醇(rabbi E2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔上腺素(rabbit EPI)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

磷酸化真核啟動(dòng)因子2α抗體

原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體

ACP5重組人 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein

序列相似家族5成員C(FAM5C)重組蛋白 Recombinant Family With Sequence Similarity 5, Member C (FAM5C)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

FGFR2 Protein Human 重組人 FGFR2 / CD332 蛋白

Spike Protein屬

CO? 獨(dú)立培養(yǎng)基Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor 0.5mgAh Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烴受體抗原

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

ACE2重組小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

PVRL1 Protein Rat 重組大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IZUMO4重組人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein