細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品主要成分

BEBM kit培養(yǎng)基  (Lonza/Clonetics，CC-3170)

備注：培養(yǎng)基包含（A+B）

A： BEBM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基         500ML

保存條件：2-8℃

B:  細(xì)胞生長添加劑            一套（包含下列試劑）

● BPE, 2.0 ml ● Hydrocortisone, 0.5 ml    ● hEGF, 0.5 ml

● Epinephrine, 0.5ml  ● Insulin,0.5 ml      ● Transferrin, 0.5 ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human guanine exchange factor (GEF) ELISA Kit 人鳥苷酸交換因子(GEF)試劑盒

Humanparathyroidhormonerelatedpeptide,PTHrpELISAKit 人副甲狀旁腺激素相關(guān)肽(PTHrp)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GuineapigLebtospiraIgG試劑盒豚鼠鉤端IgG(Lebtospira)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒(帶濾膜)20次

MouseCalcitonin,CTELISAKit小鼠降鈣素(CT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠載脂蛋白C2(APOC2)試劑盒 ，英文名： APOC2 ELISA Kit

Mouse phospho exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 小鼠0酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)試劑盒

MouseLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKIT 小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanfilameoushemagglinin,FHAELISAKit人絲狀血球凝集素

細(xì)胞/組織高粘性多聚賴載玻片制備試劑盒5次(50至100片)

ELISAKitMMP-7大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7

小鼠堿性0酸酶(ALP)試劑盒   96T/48T

小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子9(bFGF-9)試劑盒   96T/48T

小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子6(bFGF-6)試劑盒   96T/48T

小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4(bFGF-4)試劑盒   96T/48T

磷酸化Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗體

嗅覺受體51B6抗體

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽) Protein

Adenylate Kinase 1 (AK-1 0.5mgAdenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1

FAM19A2重組人 FAM19A2 蛋白  Protein

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

CLEC1A Protein Rat 重組大鼠 CLEC屬

BEGM kit培養(yǎng)基甲狀旁腺激素(PTH)重組蛋白 Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)

EGFL7 Protein Human 重組人 EGFL7 / VE-statin 蛋白

EPHA3重組小鼠 EphA3 蛋白 (aa 569-984) Protein

IL1B Protein Canine 重組狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白

CPLX3重組人 CPLX3 / Complexin 3 蛋白 Protein