正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

商品屬性：

測(cè)定意義：

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，研究表明，機(jī)體95％以上的活性氧（ROS）都來(lái)自于線粒體，其失衡所致的氧化應(yīng)激與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激，同時(shí)，活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷，導(dǎo)致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。

因此，通過檢測(cè)活性氧的變化來(lái)判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測(cè)定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴(kuò)散通過線粒體膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無(wú)熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)了利用熒光法直接定量檢測(cè)線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化的數(shù)據(jù)點(diǎn)擬合，線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液一：液體25mL×1瓶，4℃保存。

提取液二：液體25mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存。

試劑二：液體25mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體14μL×1支，4℃保存。

組織樣本的前處理：

①總GAPDH酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇 7s，總時(shí)間1min），然后 4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定。

②胞漿和葉綠體GAPDH酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿GAPDH酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間 1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中GAPDH酶活性。

建議測(cè)定總GAPDH酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（2）在試劑三中加入500μL蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（3）在1mL石英比色皿中加入30μL樣本、20μL試劑三和950μL工作液，混勻，加入最后一個(gè)試劑的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，記錄 340nm處20s時(shí)的吸光值A(chǔ)1和5min20s后的吸光值。

A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計(jì)算

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每一萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。

生化檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明：

一、抗氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測(cè)、總抗氧化能力（TAC）檢測(cè)、植物原花青素(OPC)含量檢測(cè)、植物類黃酮含量檢測(cè)、植物總酚（TP）含量檢測(cè)試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色分析法，用于測(cè)定各種樣品中的XO活性，特點(diǎn)是測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測(cè)范圍：15.6-500mU/mL。

二、氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測(cè)、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)、超氧陰離子含量檢測(cè)等試劑盒。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細(xì)胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點(diǎn)是：

1.測(cè)定組織樣本、細(xì)胞、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量。

2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。

3.保質(zhì)期長(zhǎng)。

三、抗逆系列生化檢測(cè)試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)、過氧化物酶(POD)活性檢測(cè)等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)試劑盒為例，提供一種簡(jiǎn)單易用的比色測(cè)定法，用于定量測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點(diǎn)是：

1.測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。

2.通過WST-8法測(cè)定SOD活性，最大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。

3.廣泛的檢測(cè)范圍：3.13- 200U/mL。

公司正在出售的產(chǎn)品：