細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

OVCAR-5細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持OVCAR-5細(xì)胞優(yōu)良的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 OVCAR-5細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于OVCAR-5細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基                                  445 mL

特級(jí)胎牛血清                                                 50 mL

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 試劑盒

People gathered protein (Agrin) ELISA Kit 人聚集蛋白(Agrin)試劑盒

Porcinesodium-glucosecoanspoer1,SGLT1ELISAKit 豬-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1(SGLT1)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforALP(Humanalkalinephosphatase)ELISAKit人堿性0酸酶

血液卵0脂乙酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)活性比色法定量試劑盒20次

Mouseα1-microglobulin,α1-MGELISAKit小鼠α1微球蛋白(α1-MG)試劑盒

小鼠α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA 試劑盒

Rat acidic fibroblast growth factor 1 (aFGF-1) ELISA Kit 大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)試劑盒

Humanchaperonin10,CPN10ELISAKit 人伴侶蛋白10(CPN10)試劑盒 進(jìn)口分裝

Humancirculatingimmunecomplex,CIC試劑盒人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)試劑盒

組蛋白H1激酶免疫共沉淀試劑盒10次

Humaudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit人的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)試劑盒

魚糖胺聚糖(GAG)ELISA試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

魚尿苷二0酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)移酶（UDPGT）試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

魚免疫球蛋白M（IgM）試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

魚類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

G蛋白偶聯(lián)受體41抗體

肌細(xì)胞特異性增強(qiáng)因子2D抗體

DPP7重組人 DPP7 / DPPII / DPP2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

趨化因子C-C-基元受體3(CCR3)重組蛋白 Recombinant Chemokine C-C-Motif Receptor 3 (CCR3)

MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 , Biotinylated Protein

AKT1 Protein Human 重組人 AKT1 / PKB / PKBα 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA Protein H3N2 重組甲型流感 H3N2 ???

OVCAR-5 細(xì)胞專用培養(yǎng)基D受體(VDR)重組蛋白 Recombinant Vitamin D Receptor (VDR)

ACVR1B Protein Human 重組人 ALK4 / ACVR1B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

PDCD1重組人 PD1 / PDCD1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NRG3重組人 NRG-3 / Neuregulin-3 蛋白  Protein