細胞實驗步驟：

一、細胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分布均勻，并做好標記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細胞密度及狀態(tài)；

14.將細胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

人原代直腸成纖維細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持人原代直腸成纖維細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含人原代直腸成纖維細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用人原代直腸成纖維細胞的培養(yǎng)。

注意事項：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

公司正在出售的產(chǎn)品：

HEV 戊型肝病毒(抗原 0.5mgHEV 戊型肝病毒(抗原)

AMY2A Protein Human 重組人 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (His 標簽)

CNTF重組大鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 Protein

PRKCD Protein Mouse 重組小鼠 PKC delta / PRKCD 蛋白 (His & GST 標簽)

KRAS重組人 K-Ras / K-Ras 蛋白 (His 標簽) Protein

大鼠含血管性血友病因子A域蛋白1(vWA1)試劑盒 ，英文名： vWA1 ELISA Kit

Rat 6 keto prostaglandin (6-K-PG) ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)試劑盒

RatsolubleToll-likereceptor2,sTLR-2ELISAKit 大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforeNOS(MouseEndothelialniicoxidesyhase)ELISAKit小鼠內(nèi)皮型合成酶

細胞0脂皮爾斯(Pearse)染色試劑盒50次

Ratleukemiainhibitoryfactor,LIFELISAKit大鼠白血病抑制因子(LIF)試劑盒

豬白介素8(IL-8/CXCL8)ELISAKit   ELISA. 

豬白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA. 

豬白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA. 

豬白介素3(IL-3)ELISAKit   ELISA.

豬肝細胞生長因子(HGF)ELISA 試劑盒

Human Ureaplasma urealyticum aibody (UU-Ab) ELISA Kit 人解脲脲原體抗體(UU-Ab)試劑盒

PorcineEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 豬內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha-bungarotoxin,Alpha-BGTELISAKitα-銀環(huán)蛇毒素

血液賴(lysine)含量化學(xué)比色法定量試劑盒20次

NudeMouseProteinPhosphatase,PPELISAKit裸鼠蛋酸酶(PP)試劑盒

PE-Cy5標記人CD56 (NCAM)單克隆抗體

腺相關(guān)病毒5 VP1抗體

人原代直腸成纖維細胞專用培養(yǎng)基CNTF重組大鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 Protein

HEV 戊型肝病毒(抗原 0.5mgHEV 戊型肝病毒(抗原)

KRAS重組人 K-Ras / K-Ras 蛋白 (His 標簽) Protein

AMY2A Protein Human 重組人 AMY2A / Alpha-amylase 蛋白 (His 標簽)

PRKCD Protein Mouse 重組小鼠 PKC delta / PRKCD 蛋白 (His & GST 標簽)

細胞培養(yǎng)步驟：

?細胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細胞傳代?：

當(dāng)細胞長到80%~90%時，進行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當(dāng)細胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細胞培養(yǎng)液重懸細胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補加新鮮培養(yǎng)基。

做好標記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細胞進行凍存。

將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。

將細胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。