細胞實驗步驟：

一、細胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分布均勻，并做好標記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細胞密度及狀態(tài)；

14.將細胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

RMPI 1640培養(yǎng)液是由Moor等研究成功的，最初為培養(yǎng)小鼠白血病細胞的需要而準備。開始的配方特別適合懸浮細胞的生長，主要針對淋巴細胞，后經(jīng)多次改良從RPMI 1630、1634，而至RMPI 1640。其組成較為簡單，但可以適應(yīng)很多種類細胞的生長。不僅腫瘤細胞，而且很多正常組織細胞可用RMPI 1640進行體外培養(yǎng)。實驗室一般將RMPI 1640作為實驗和細胞維持的基本培養(yǎng)液，目前RMPI 1640是應(yīng)用較為廣泛的培養(yǎng)基之一。本培養(yǎng)基為無添加葡萄糖RMPI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意事項：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細胞培養(yǎng)步驟：

?細胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細胞傳代?：

當細胞長到80%~90%時，進行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當細胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細胞培養(yǎng)液重懸細胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補加新鮮培養(yǎng)基。

做好標記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細胞進行凍存。

將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。

將細胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠熱休克蛋白20(Hsp-20)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human urinary protein (UP) ELISA Kit 人尿蛋白(UP)試劑盒

HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMWELISAKit 人高分子量細胞角蛋白(CK-HMW)試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineapigleukoieneD4,LT-D4試劑盒豚鼠白三烯D4(LTD4)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞壁可溶性總蛋白制備試劑盒20次

MouseCA724ELISAKit小鼠標志物(CA724)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠抑制素B(INHB)試劑盒 ，英文名： INHB ELISA Kit

Mouse immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白M(IgM)試劑盒

MouseP-SelectinELISAkit 小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanDiphtheriaaibodyELISAKit人白喉抗體

細胞Akt/PKB激酶總活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitsmActinin-α大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α

血紅蛋白檢測    (Mg) test case (machine, manual)

產(chǎn)品名稱   Serum low-density lipoprotein (LDL) test kit

甘油三酯（TG酶法）測試盒   Serum high-density lipoprotein (HDL) test kit

總（CHO酶法）測試盒   Glucose (Glu) test case

磷酸化胰島素受體抗體

有絲分裂控制蛋白dis3抗體

CNTNAP2重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

ENPP2重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein

FGFR4 Protein Hum屬

RPMI-1640 無糖培養(yǎng)基CaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha 0.5mgCaMK2a(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II alpha) 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗原

F9 Protein Human 重組人 Coagulation Factor IX / FIX / F9 蛋白

CPB1重組小鼠 Carboxypeptidase B1 / CPB1 蛋白 Protein

SLAMF1 Protein Rat 重組大鼠 CD150 / SLAM / SLAMF1 蛋白

TP63重組人 P63 / TP63 / Tumor protein p63 蛋白 (His & GST 標簽) Protein